Оценка иммунного статуса

Оценка иммунного статуса организма начинается с ориентировочного клинического (первого) этапа, на котором врач собирает и оценивает иммунологический анамнез: частоту инфекционных заболеваний, характер их течения, выраженность температурной реакции, наличие очагов хронической инфекции, признаков аллергизации. Далее оцениваются результаты клинического анализа крови: содержание гранулоцитов, моноцитов, лимфоцитов. С помощью бактериологических, вирусологических и серологических исследований выявляется бактерио- или вирусоносительство.

На втором этапе в иммунологической лаборатории проводится исследование крови с использованием иммунологических тестов 1-го и 2-го уровней.

Тесты 1-го уровня позволяют выявить грубые нарушения со стороны иммунной ситемы путем определения в крови процентного содержания и абсолютного количества Т- и В-лимфоцитов, уровня иммуноглобулинов крови, оценки показателей неспецифической защиты организма. Для выявления и подсчета Т-и В-лимфоцитов наиболее точными являются методы, состоящие в выявлении поверхностных маркеров - антигенов системы CD.

К этим антигенам биопромышленность готовит стандартные моноклональные антитела и наборы реактивов, позволяющие в имму-нолюминесцентных и цитотоксических тестах (см. далее) выявить Т-и В-лимфоциты, их субпопуляции, другие клетки иммунной системы. Так, маркером Т-лимфоцитов служит антиген CD3, В-лимфоцитов - CD22, хелперных Т-лимфоцитов - CD4, цитотоксических лимфоцитов - CD8, естественных киллеров - CD 16, CD56.

Т- и В лимфоциты выявляют также по их способности фиксировать на своей поверхности эритроциты барана или мыши, образуя видимые под микроскопом структуры, именуемые розетками. В-лимфоциты, обладающие рецепторами для иммуноглобулина G и комплемента могут быть выявлены также по способности формировать розетки с эритроцитами, нагруженными этими белками. Содержание в крови здорового взрослого человека Т-клеток - 40-70%, В-лимфоцитов - 10-30% общего числа лимфоцитов. Некоторые лимфоциты (около 5%) не имеют маркеров Т-или В-клеток. Это нулевые лимфоциты, утратившие рецепторы. Их число возрастает при некоторых заболеваниях. Кроме того, к тестам 1-го уровня относится определение концентрации сывороточных иммуноглобулинов IgM, IgG и IgA. Для этого используются антисыворотки к тяжелым цепям иммуноглобулинов разных классов, реакция преципитации или нефелометрия и турбидометрия, выявляющие взаимодействие иммуноглобулина с антителами по светорассеянию или мутности. Уровень сывороточных иммуноглобулинов отражает функциональное состояние В-системы иммунитета.

Для оценки факторов неспецифической защиты организма определяют фагоцитарную активность лейкоцитов крови. О фагоцитарной активности судят по способности клеток к фагоцитозу нейтральных частиц латекса, эритроцитов или микробных клеток. При этом вычисляют процент фагоцитирующих клеток (фагоцитарное число) и среднее число частиц поглощенных одним фагоцитом (фагоцитарный индекс). Тесты 2-го уровня позволяют провести более тщательный анализ для уточнения характера дефекта, выявленного на предыдущем этапе с помощью ориентировочных тестов. К ним относится определение субпопуляций Т-лимфоцитов (CD4+ и CD8+), их соотношений, оценка их функциональной активности, супрессорного потенциала, анализ цитокинов и их рецепторов. Функциональная активность лимфоцитов может быть оценена по количеству бластных форм, нарастающих после активации клеток.

Потенциальную способность лимфоцитов к активации оценивает после стимуляции митогенами, фитогемагглютином и др., культивируемых вне организма клеток. Количество бластных форм может быть определено при микроскопии. Более точен и чувствителен радиометрический метод, оценивающий интенсивность включения радиоактивных предшественников (тимидина) в ДНК культивируемых клеток. Для оценки иммунной защиты слизистых используется определение секреторных иммуноглобулинов IgA.

Уровень активности фагоцитов оценивают по их способности к ферментативной обработке поглощенных клеток. Наиболее распространен так называемый НСТ-тест, основанный на выявлении способности клеток восстанавливать бесцветный реактив нитросиний тетразоль в краситель, окрашивающий активную клетку в синий цвет.

Выявление антигенов

Современные иммунологические методы позволяют выявить менее 0,05 нг антигена в 1 мл субстрата (1 нанограмм = 10-9 грамма). Создание иммуногенных антигенов из относительно простых пептидов путем их конъюгации с высокомолекулярным носителем открыло широкие возможности получения к ним антител и приготовления готовых наборов реактивов для выявления в организме и вне организма большого числа веществ ранее недоступных иммунологическому исследованию.

Традиционными для инфекционной иммунологии являются методы обнаружения в крови обследуемых людей антигенов микроорганизмов. Обнаружение таких антигенов служит ранним и достоверным признаком наличия инфекции в организме. Длительное обнаружение микробных антигенов свидетельствует о персистенции возбудителя и недостаточности иммунной реакции для их элиминации.

В случаях развития в организме деструктивных процессов в крови могут появляться нормальные или измененные антигены поврежденных тканей. Так, при инфарктах миокарда в крови могут быть обнаружены антигены сердечной мышцы, при травмах головного мозга - антигены нервной ткани, при синдроме длительного сдавления - антигены поврежденных органов.

Широко используются методы выявления в крови, моче, других средах организма гормонов для диагностики беременности (хорио-нический гонадотропин), эндокринных расстройств. В онкологии существенное диагностическое значение имеет выявление опухолевых антигенов в крови обследуемых.

Определение антигенов крови и тканей лежит в основе гемотрансфузий и трансплантации органов и тканей. Эти же методы используются для идентификации личности, установления отцовства.

Иммунологические методы используются для определения в организме лекарственных веществ, наркотиков, анаболических и других средств, используемых для повышения физических возможностей спортсменов. Антигенный анализ используется для идентификации микроорганизмов, выделенных от человека.

Специфические реакции организма на антиген

Одной из основных задач иммунологического обследования человека является выявление наличия и особенностей иммунного ответа организма на антигенное воздействие.

Обнаружение антител к предполагаемому возбудителю служит одним из основных диагностических признаков инфекционного заболевания. Обнаружение антител - поздний признак, так как антитела появляются в крови через 5-7 сут. после начала инфекционного процесса. Кроме того, антитела могут содержаться в крови ранее болевших или перенесших субклиническую форму инфекции, у ранее вакцинированных людей. Диагностическое значение имеют высокие уровни антител, их появление или нарастание при повторных исследованиях. Выявление антител класса Е к аллергенам служит надежным доказательством наличия аллергического заболевания и позволяет установить какой именно аллерген был его причиной.

В поисках причины иммунопатологического или аутоиммунного процесса нередко определяют антитела к антигенам органов и тканей. Трактовка результатов таких исследований может быть неоднозначной, так как далеко не во всех случаях аутоантитела способны вызвать иммунопатологическое повреждение.







Также в разделе: Клиническая иммунология:
  » Вакцины
  » Серологические реакции
  » Иммунные сыворотки и иммуноглобулины
  » Получение моноклональных антител (гибридомная технология)