Папилломо-вирусная инфекция (HPV). HPV HCR - генотипирование

Вирусы папилломы человека (ВПЧ) - широко распространенная и наиболее вариабельная группа вирусов, инфицирующих человека. Это маленькие безоболочечные ДНКвирусы, являющиеся представителями семейства Papillomaviridae.

Вирусы передаются при микротравмах кожи и слизистых оболочек, а также половым путем. При родах вирусы передаются новорожденным. А также возможен путь - инфицирование во время зачатия через сперму.

Папилломовирусы человека инфицируют и размножаются в сквамозном эпителии кожи, образуя доброкачественные бородавки, и в слизистых оболочках, вызывая генитальные, оральные и конъюнктивальные папилломы; индуцируют пролиферацию эпителия. Папилломовирусы обладают онкогенным потенциалом.

На сегодняшний день известно более 100 типов HPV, более 30 из которых являются аногенитальными, т.е. способны инфицировать слизистую половых органов. Папилломавирусы могут оказывать продуктивное и трансформирующее воздействие на слизистую оболочку. Проявлением продуктивного воздействия являются папилломы и кондиломы, проявлением трансформирующего – дисплазии в различной степени, внутриэпителиальный рак и инвазивный рак или рак шейки матки (РШМ). Риск злокачественного перерождения связан с несколькими типами ВПЧ. Они были обозначены как вирусы высокого риска онкогенного заболевания. Это типы ВПЧ 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 и 68. Перечень типов ВПЧ высокого онкогенного риска расширяется за счет уточнения строения ДНК и появления новых типов промежуточного риска.

Вирусами низкого риска остаются 5 типов ВПЧ – 6, 11, 42, 43, 44. Вирусы папилломы человека типа 6 и 11 признаны этиологическим началом рецидивирующего респираторного папилломатоза, который обычно поражает носоглотку, трахею, гортань, может прогрессировать и стать распространенным бронхопульмональным заболеванием, а также известны как возбудители генитального кондиломатоза. Если новорожденным детям ВПЧ передается в родах от инфицированной матери, то респираторный рецидивирующий папилломатоз у взрослых считают результатом сексуальной передачи.

В настоящее время доказано, что инфекция ВПЧ является главным фактором риска развития РШМ, все остальные факторы (число половых партнеров, сопутствующие инфекции, снижение общего и местного иммунитета) действуют опосредовано. Инфекция ВПЧ не всегда приводит к РШМ (только в 2 – 5% случаев). Однако вероятность заболевания возрастает до 40% в случаях инфицирования высококанцерогенными типами. Инфекция ВПЧ может быть подавлена иммунной системой или в 15% случаев прогрессировать в дисплазию легкой степени. Приблизительно в 70% случаев происходит спонтанная регрессия дисплазии или она остается без какихлибо изменений. В 15% случаев она прогрессирует в дисплазию тяжелой степени в течение 2х лет. Дисплазию в тяжелой степени необходимо лечить, т.к. при отсутствии лечения она в 40% случаев прогрессирует в инвазивный рак. Лечение инвазивного рака дорого и практически неэффективно. Более 90% цервикальных карцином позитивны на присутствие вирусов папилломы человека. Наиболее часто в материале из опухолей шейки матки обнаруживают типы 16 и 18 вирусов. ДНК HPV типа 16 часто выявляют в клетках уротелиальной карциномы при раке мочевого пузыря у пациентов с иммунодефицитом.

Папилломавирусная инфекция может быть клинически выраженной, протекать субклинически или быть латентной. У женщин инфицируется и покрывается генитальными бородавками область преддверия влагалища, стенки влагалища, шейки матки, наружное отверстие уретры, анальная область. У мужчин поражается головка полового члена, крайняя плоть, мошонка, анальная область.

Для выявления ДНК ВПЧ применяют в основном два метода:

• гибридизация нуклеиновых кислот с РНКзондами с последующим выявлением с помощью моноклональных антител к ДНК:РНКкомплексу, реализована в тестсистеме «Hybrid Capture II»;
• полимеразная цепная реакция, которая используется для выявления ДНК ВПЧ и определения типа вируса.

Высокая вариабельность вируса не позволяет с помощью только одной пары праймеров с достаточной чувствительностью и специфичностью выявлять все типы ВПЧ высокого канцерогенного риска, поэтому обычно используют сложные комбинированные методики – амплификацию с вырожденными праймерами (MY11/MY09), дополнительно исследуя ампликоны различными методами (гибридизация со специфическими зондами, секвенирование) с целью определения типа или ограничиваются выявлением только некоторых типов, например, 16 и 18, считая что они обладают наибольшей степенью канцерогенного риска. Действительно, 16 и 18 типы выявляются в более чем J% случаев инвазивного рака, но более 35% приходится на остальные 12 типов ВПЧ высокого риска малигнизации. Кроме того, степень риска косвенно зависит от распространенности типа на данной территории. Чтобы с помощью простой одностадийной ПЦР выявлять не только два, а все четырнадцать или более типов ВПЧ ВКР необходимо проводить четырнадцать реакций, что делает скрининговое исследование громоздким, а его эффективность значительно снижается. Для упрощения процедуры скрининга удобно использовать мультиплексПЦР, когда в одной пробирке амплифицируется сразу несколько типов, а амплифицирующиеся участки имеют разную длину. Тогда количество реакций можно сократить до трехчетырех. Материалом для исследования служат пунктаты опухолей, лимфатических узлов, отделяемое из влагалища, носа, трахеи, моча. Обнаружение в исследуемом материале вируса папилломы человека определенного типа еще не говорит о наличии у пациента злокачественной опухоли, но требует проведения гистологического исследования субстрата болезни и последующего динамического наблюдения за ним. Высказывается мнение о важной роли обнаружения вирусов папилломы человека в биоптатах лимфатических узлов при цервикальной карциноме, для определения объема оперативного лечения и выявления, интактных и пораженных метастазами лимфатических узлов. При нахождении вирусов папилломы человека в лимфатических узлах, даже при отсутствии гистологических признаков их опухолевого поражения, результаты исследования необходимо расценивать как наличие метастазов в лимфатические узлы.

Вирусы папилломы человека (Human papillomavirus HPV), определение ДНК

Общий тест на качественное выявление вирусов папилломы человека следующих типов: 11, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 52, 56, 58, 59 методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Аналитические показатели: для выявления ДНК вируса папилломы человека (ВПЧ) в соскобе эпителиальных клеток методом ПЦР. Определяемый фрагмент уникальная последовательность ДНК (L1 область вирусного генома). Специфичность определения 100%. Чувствительность определения не менее 50 вирусных частиц в 5 мкл прошедшей обработку (выделение ДНК) пробы. Эффективность обнаружения ДНК ВПЧ методом ПЦР 98%.

Показания к назначению анализа:

• Проявления трансформирующей дисплазии в различной степени.
• Оспабление иммунитета.
• Профилактические скрининговые исследования.

Не требуется.

Соскобы из урогенитального тракта, моча, сперма, соскоб эпителия с поверхности разрастаний и изъязвлений.

Если время транспортировки биоматериала с момента его взятия до доставки в лабораторию составляет более двух часов, то пробирку с соскобом необходимо заморозить при -20°С и перевозить в контейнере с хладагентом. В замороженном виде соскоб хранится не более двух недель.

2 рабочих дня.

Вирусолог.